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核酸环境样本如何提取

  • 核酸检测
  • 2025-09-27 00:31
  • 来源:www.hesuanjiance.cn
  • 核酸检测网

核酸环境样本的提取流程主要包括样本采集、核酸提取、纯化及质控等步骤,需结合实验室规范操作以确保结果准确性。以下是具体方法:

样本采集

环境样本通常采集高频接触表面(如门把手、桌面),使用无菌拭子蘸取病毒保存液或生理盐水反复擦拭,旋转拭子以确保充分接触。采集后立即密封标记,4℃暂存或-80℃长期保存以避免核酸降解。

核酸提取

1. 裂解处理:将拭子与裂解液震荡混匀,释放核酸。对于RNA病毒需加入RNA酶抑制剂防止降解。

2. 纯化方法

  • 离心柱法:通过硅基质吸附柱去除PCR抑制物(如金属离子、有机物),洗脱后获得纯化核酸。
  • 磁珠法:利用磁珠吸附核酸,配合去蛋白液和洗涤步骤去除杂质,最后洗脱高纯度核酸。
  • 质量控制

  • 内参基因:加入人类管家基因作为采样质控,避免假阴性。
  • 环境监测:定期检测实验室环境样本,排除污染风险。
  • 注意事项

  • 避免样本反复冻融,提取后短期保存于-20℃,长期保存于-80℃。
  • 裂解液与样本比例需严格匹配,确保充分裂解且无杂质残留。
  • 若提取效率低,需检查磁珠分散性、洗涤步骤是否彻底,而非单纯增加磁珠用量。

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