核酸检测中的荧光探针法是一种结合PCR技术与荧光标记技术的分子检测方法,其核心原理是通过特异性荧光探针实时监测核酸扩增过程,实现高灵敏度、高特异性的靶序列检测。以下是具体:
1. 探针设计:荧光探针通常为一段与目标DNA互补的寡核苷酸序列,两端分别标记荧光报告基团(如FAM)和淬灭基团(如BHQ)。当探针完整时,荧光基团能量被淬灭基团吸收,不发光;当PCR扩增时,Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针,释放荧光信号。
2. 信号检测:随着扩增循环进行,荧光信号累积,仪器实时记录荧光强度变化,生成扩增曲线。通过阈值循环数(Ct值)定量初始模板量,Ct值越小表示起始模板浓度越高。
该技术通过荧光共振能量转移(FRET)实现分子水平的精准检测,是临床诊断和科研的重要工具。