结核分枝杆菌核酸提取是诊断结核病的关键步骤,其核心流程包括样本采集、前处理、核酸分离及纯化等环节。以下是具体操作步骤及技术要点:
1. 样本类型:常用痰液(晨痰最佳)、支气管灌洗液、胸腹水或组织标本。痰液需深咳获取3-5mL,避免混入口腔细菌。
2. 前处理方法:
1. 自动化提取:采用如MagDEA Dx SV试剂配合全自动系统(如geneLEAD XII Plus),从200μL预处理样本中提取DNA,耗时约1-2小时。
2. 手动提取:通过蛋白酶K消化结合酚-氯仿法或商用核酸提取试剂盒纯化DNA。
不同方法的选择需权衡速度、灵敏度与成本,自动化系统更适合高通量检测,而手动法适用于资源有限场景。