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结核分枝杆菌核酸提取

  • 核酸检测
  • 2025-09-27 02:00
  • 来源:www.hesuanjiance.cn
  • 核酸检测网

结核分枝杆菌核酸提取是诊断结核病的关键步骤,其核心流程包括样本采集、前处理、核酸分离及纯化等环节。以下是具体操作步骤及技术要点:

一、样本采集与预处理

1. 样本类型:常用痰液(晨痰最佳)、支气管灌洗液、胸腹水或组织标本。痰液需深咳获取3-5mL,避免混入口腔细菌。

2. 前处理方法

  • 化学消化:使用4%氢氧化钠或N-乙酰-L-半胱氨酸(NALC)溶液液化痰液,消除杂菌干扰。例如,NALC法需将痰液与等体积NALC-NaOH混合,室温搅拌15分钟后离心浓缩。
  • 加热灭活:部分流程需95℃加热20分钟以裂解菌体释放核酸。
  • 二、核酸提取技术

    1. 自动化提取:采用如MagDEA Dx SV试剂配合全自动系统(如geneLEAD XII Plus),从200μL预处理样本中提取DNA,耗时约1-2小时。

    2. 手动提取:通过蛋白酶K消化结合酚-氯仿法或商用核酸提取试剂盒纯化DNA。

    三、关键注意事项

  • 生物安全:操作需在生物安全柜内进行,样本需灭活以降低感染风险。
  • 质量控制:提取后核酸需通过荧光定量PCR检测特异性基因(如IS6110或rpoB)验证质量。
  • 不同方法的选择需权衡速度、灵敏度与成本,自动化系统更适合高通量检测,而手动法适用于资源有限场景。

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