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北京核酸染料染色原理

  • 核酸检测
  • 2025-09-27 02:27
  • 来源:www.hesuanjiance.cn
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1. 嵌入结合:染料分子通过平面结构嵌入核酸双链的碱基对之间,依赖疏水相互作用和碱基堆积力实现稳定结合。这种结合方式对双链核酸具有特异性,因单链核酸缺乏规则螺旋结构而结合较弱。

2. 静电相互作用:带正电荷的染料(如溴化乙锭)与核酸磷酸骨架的负电荷通过静电吸引结合,离子强度升高会增强此类作用。

3. 荧光特性改变:染料结合后因微环境变化(如极性降低)导致荧光增强或发射波长偏移。例如,EB-DNA复合物的荧光强度比游离EB高20-30倍。

4. 影响因素

  • 温度:适度升温可促进双链解旋以增强结合,但过高温度会破坏复合物。
  • pH与离子强度:影响电荷状态及静电作用,高离子强度可屏蔽磷酸骨架排斥力。
  • 核酸浓度与长度:低浓度核酸易饱和结合,长链核酸提供更多嵌入位点。
  • 5. 染料类型差异

  • EB:高灵敏但具强致癌性,需严格防护。
  • SYBR Green系列:对单链核酸(如RNA)灵敏度更高,荧光强度为EB的7倍,且安全性更优。
  • - MIDORIGreen:新型非致癌染料,无法穿透细胞膜,适合安全实验需求。

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