核酸杂交探针是用于检测特定核酸序列的标记核酸片段，其核心特征是通过碱基互补配对与目标序列结合，并通过标记物（如荧光、酶或放射性同位素）实现可视化检测。以下是关键分类与特点：
探针类型
1. DNA探针
通过基因克隆或PCR扩增获取，需变性为单链后使用。
稳定性高，但制备过程较复杂，灵敏度依赖靶标丰度。
2. RNA探针
单链cRNA通过体外转录合成，无需变性，与靶标互补性更佳。
灵敏度高但易被RNA酶降解，需严格实验条件。
3. 寡核苷酸探针
人工合成的短单链DNA（15-50bp），设计灵活且特异性强。
适用于检测单碱基突变，广泛用于实时PCR（如TaqMan探针）和微阵列技术。
探针标记方法
切口平移法：标记链覆盖大部分核苷酸序列。
随机引物法：扩增产物包含所有序列信息，适合DN段标记。
PCR标记法：适用于低浓度探针的大规模制备。
末端标记法：通过酶促反应在DN段末端引入标记物。
应用场景
探针广泛应用于基因筛选、病原体检测（如qPCR中的TaqMan探针）及原位杂交（如荧光原位杂交）。其选择需综合考虑靶序列特性、标记方式及实验条件优化。
